Super ECL Star（特超敏化学发光检测试剂盒）

Super ECL Star（特超敏化学发光检测试剂盒）

储存条件
4℃密封避光保存，短期可放置于室温。有效期见外包装。

产品介绍

Super ECL Star 最高灵敏度底物是一款具有超高灵敏度 的增强型化学发光（ECL）底物，可通过辣根过氧化物酶 （HRP）实现极低表达或高价值蛋白的免疫印迹检测。Super ECL Star 特超敏发光液用于检测直接或间接标记辣根过氧 化物酶 HRP 的抗体及其关联的抗原。由于采用了独特的发 光底物系统，Super ECL Star 超敏发光液是极度灵敏的荧光 ECL 检测试剂。

Super ECL Star（特超敏）特点： 1. 具有极高灵敏度和高信噪比，使用适当的一抗和二抗时， 可在硝化纤维膜或 PVDF 膜上检测极低表达或高价值蛋白 的条带； 2. 明亮信号。通过胶片或成像系统曝光，易于捕获图像； 3. 价格经济：配方经过优化，可适用于浓度极低的抗体检 测。 • 10 ng-0.2 μg/mL 一 抗 （ 或 1 mg/mL 的 稀 释 1:5,000-1: 100,000） • 2 ng-10 ng/mL 二 抗（ 或 1 mg/mL 的 稀释 1:100,000-1: 500,000）

使用方法

1. 执行常规 SDS-PAGE 电泳、转膜和 Western Blot 步骤， 0.01-0.2 μg/mL 一抗室温孵育 1 h 或 4℃过夜，洗膜后，2-10 ng/mL 二抗孵育 30-60 min。 2. Western Blot 最后一次洗膜时，新鲜配制发光工作液：分 别取等体积的溶液 A 和 B，混匀。 注：建议立即使用工作液，室温放置数小时后仍可使用但灵 敏度略有降低。 3. 成像仪检测：用镊子取出 PVDF 膜置于成像仪检测板上， 含蛋白面朝上，沥干洗液但勿使膜完全干燥。将发光工作液 （0.125 mL 发光工作液/cm2 膜）滴加在 PVDF 膜上，使发 光液完全覆盖 PVDF 膜，室温孵育 3-5 min，参考仪器说明 书进行检测。 4. 压片检测：用镊子取出 PVDF 膜置于保鲜膜上，含蛋白 面朝上，沥干洗液但勿使膜完全干燥。将发光工作液（0.125 mL 发光工作液/cm2膜）滴加在 PVDF 膜上，使发光液完全 覆盖 PVDF 膜，室温孵育 3-5 min，弃发光工作液，用保鲜 膜包好，将膜固定于片夹内，含蛋白面向上。暗室内压片 1 min，立即显影，根据结果再调整压片时间。或分别压片 0.5、 1、3、5 min，然后一起显影观察结果。

注意事项

1. 步骤 1~4 可在日光灯下操作，但发光液曝露于强光下时 间过久灵敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。戴手 套可以避免在膜上留下手印。 2. 长时间曝光或蛋白过量，将加深背景并使条带强弱变化 失去线性关系，曝光不足则条带模糊。 3. 如果曝光后条带不佳，可用洗膜缓冲液洗膜，重新孵育 二抗，然后重新用 ECL 发光和曝光。 4. 由于特超敏发光液极其灵敏，强烈推荐大多数进口抗体稀释浓度为一抗 1:5000~1:100,000，二抗 1:100,000~ 1: 500,000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带。 5. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光，应选择高质 量保鲜膜。 6. 使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影 曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。 7. NaN3 能抑制 HRP 活性，回收第二抗体应避免使用 NaN3， 如必需使用勿超过 0.01%。