原理

HotStarTaq Plus Master Mix是一种即用型预混液，包含HotStarTaq DNA Polymerase、QIAGEN PCR Buffer、MgCl₂和dNTPs。HotStarTaq Plus DNA Polymerase，具备同HotStarTaq DNA Polymerase一样的卓越表现，激活时间只需5分钟。

HotStarTaq Plus DNA Polymerase是一种经修饰的QIAGEN Taq DNA Polymerase，以非活性形式提供，常温下没有聚合酶活性。避免PCR构建和循环初始阶段低温条件下非特异性引物的延伸和引物二聚体的形成（参见Highest specificity和Higher specificity with different primer-template systems）。95°C条件下孵育5分钟即可激活HotStarTaq Plus DNA Polymerase，这个步骤可整合入已有的热循环程序中。

QIAGEN PCR Buffer

QIAGEN PCR Buffer通过提高每个PCR扩增退火过程特异性引物的结合比例，确保PCR每个循环特异性扩增（参见Increased specificity of primer annealing）。独特的KCl和(NH₄)₂SO₄平衡组合，使得该缓冲液与传统的PCR缓冲液相比在很宽的温度和Mg²⁺浓度范围内都有严格的引物退火条件和高度的特异性，无需进行耗时的优化。

CoralLoad PCR Buffer

HotStarTaq Plus DNA Polymerase同时提供CoralLoad PCR Buffer，CoralLoad PCR Buffer具备QIAGEN PCR Buffer的所有优点，同时可直接将PCR产物上样到琼脂凝胶上，无需加入凝胶上样缓冲液。CoralLoad PCR Buffer具备同样高的PCR特异性，与常规的QIAGEN PCR Buffer一样可减少优化过程。此外，它包含两种指示染料，橙色染料和红色染料，可方便的判断DNA的迁移距离和优化跑胶时间（参见CoralLoad PCR Buffer）。该缓冲液提高移液的可见性，并可直接将PCR产物上样至凝胶，提高便利性。

操作流程

HotStarTaq Plus Master Mix Kit以方便的预混液形式提供，易于使用。95°C条件下孵育5分钟即可激活HotStarTaq Plus DNA Polymerase，可以整合入已有的热循环程序。在室温下应用该预混液可快速、简单地构建反应体系，只需将10 µl HotStarTaq Plus Master Mix加入每个PCR反应管，并加入10 µl溶于该试剂盒提供的RNase-free蒸馏水的引物和模板DNA（参见HotStarTaq Plus procedure）。 移液步骤最少化，降低操作误差和污染风险，确保提高通量和可重复性。该试剂盒提供高效、经优化的实验方案，用于快速、方便的PCR反应体系构建。同时试剂 盒提供CoralLoad Concentrate，提高移液的可见性，并可直接将PCR产物上样至凝胶，提高便利性。

应用

HotStarTaq Plus Master Mix Kit适合多种应用，包括各种富有挑战性的研究，如各种扩增应用：

• 复杂的基因模板
• 复杂的cDNA模板（如RT-PCR）
• 低拷贝的靶分子（如单细胞PCR）
• 多重引物对反应