• 快速方便的单管反应
• 适合各种RNA模板，无需优化反应条件
• 独特的酶组合，确保反应的高特异性和高灵敏度
• 经优化的缓冲体系确保了高效的逆转录和扩增过程

QIAGEN One-Step RT-PCR Kit包含Omniscript逆转录酶和Sensiscript逆转录酶的混合物、HotStarTaq DNA Polymerase、QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer、dNTP混合液和Q-Solution。Q-Solution是一种新型的辅助剂，有助于实现“困难”模板（如：高GC含量的模板）的高效 扩增。简单的单管反应体系构建和优化的试剂盒组分确保了结果成功且灵敏度高。

原理

QIAGEN OneStep RT-PCR Kit可对多种RNA模板进行简单、灵敏的一步式RT-PCR。

QIAGEN OneStep RT-PCR Enzyme Mix含有为逆转录和PCR反应特别设计的酶。独特组合的Omniscript和Sensiscrip逆转录酶对RNA模板有高度亲和性，确保RNA逆转 录的灵敏度达到1 pg到2 µg。逆转录完成后，升温至95°C，15分钟，活化HotStarTaq DNA Polymerase同时使逆转录酶失活。这种方法可减少引物二聚体等非特异性扩增产物的生成，并减少背景的影响，确保RT-PCR的高灵敏度和可重复 性。

退火温度范围宽

引物的最佳退火温度取决于碱基对的组成（如A、T、G、C核苷酸的比例）、引物的浓度和反应的离子环境。QIAGEN PCR Buffers含有K⁺和NH₄⁺，使用该缓冲液可在很宽的温度范围内增加特异性PCR产物的产量（参见Increased specific primer annealing）。其原理是破坏非特异性结合的引物对，提供更加可靠的反应环境，减少繁琐的温度优化过程。相反，如使用仅含K⁺的PCR或一步式RT-PCR缓冲液，PCR最佳退火温度的范围较窄，可靠性较差。

QIAGEN OneStep RT-PCR Buffer专为提高逆转录和PCR扩增的效率而设计。该缓冲液含有新型辅助剂，可防止逆转录酶对PCR扩增的抑制，而这是一步式RT-PCR中常见的问题。该缓冲液确保在较大的温度范围和Mg²⁺浓 度范围内，引物与模板特异性结合，可对多种RNA模板进行高效的RT-PCR扩增。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有Q-Solution，这是可修饰核酸熔解行为的新型辅助剂。Q-Solution可促进高GC含量或含较多二级结构的模板的逆转录和扩增。 使用Q-Solution可简化复杂模板RT-PCR的优化过程。QIAGEN OneStep RT-PCR Kit含有您所需的所有试剂，可进行快速、简便的RT-PCR，用于多种灵敏的应用（见表）。

可靠的一步式RT-PCR结果

QIAGEN OneStep RT-PCR Kit 组分	特点
HotStarTaq DNA Polymerase	高度特异性产物
Sensiscript and Omniscript Reverse Transcriptases	RNA初始量的范围大 (1 pg–2 µg) 高灵敏度
OneStep RT-PCR Buffer	无需优化 反转录酶不会抑制PCR 抑制RNases
Q-Solution	促进GC含量高的模板的扩增

 

操作流程

使用QIAGEN OneStep RT-PCR Kit可快速、简单的进行RT-PCR反应体系构建。无论是何种应用，即无论是病毒检测、分子诊断研究还是基因表达，您只需将所有试剂在一个离心管中混合即可开始PCR扩增（参见OneStep RT-PCR procedure）。反应混合液含有逆转录和PCR反应所需的所有试剂，无需添加其他试剂即可开始反应（参见下表）。

应用

QIAGEN OneStep RT-PCR Kit适用于RT-PCR分析，包括：

• 病毒检测
• 单细胞RT-PCR
• 基因表达分析