EndoFree Plasmid Maxi Kit (10)
货 号:12362
产品规格:10T
原 产 地:德国
参考价格:3760 (参考价格,以实际价格为准)
优惠价格:
EndoFree Plasmid Maxi Kit (10) qiagen12362
纯化得到至多500 μg无内毒素高转染级纯质粒或柯斯质粒DNA
纯化得到的DNA内毒素低于0.1 EU/µg
纯化流程快,同时去除内毒素
获得高产量的高拷贝质粒DNA
使用LyseBlue,获得最佳的裂解和高产量的DNA
EndoFree Plasmid Kits基于阴离子交换技术,可快速制备不含内毒素的质粒DNA。QIAfilter Cartridges通过过滤快速澄清裂解液,DNA产量至多500 μg(Maxi)、2.5 mg(Mega)和10 mg(Giga)。制备的DNA纯度超过两次CsCl梯度离心法所得DNA的纯度,非常适合超转染级纯的应用。
性能
EndoFree Plasmid Maxi Kit将高效的内毒素去除步骤整合到质粒纯化过程中,不需要额外步骤,也不需用亲和柱去除脂多糖。通过QIAfilter Maxi Cartridge过滤细菌裂解液,通过重力流QIAGEN-tip 500阴离子交换柱纯化质粒DNA。100–250 ml培养菌液至多可纯化500 µg DNA。(培养量取决于质粒拷贝数量、插入片段大小、宿主菌和培养介质。)纯化的DNA无内毒素(<0.1 EU/µg DNA)。
EndoFree Plasmid Kits去除细菌在裂解过程中释放的内毒素,内毒素会影响原代细胞和敏感培养细胞的DNA转染。从EndoFree Plasmid Kits得到的无内毒素DNA高度适用于可重复且结果可靠的转染
质粒制备中的内毒素水平* 质粒准备方法 内毒素(EU†/µg DNA) 平均转染效率‡
EndoFree Plasmid Kit 0.1 154%
QIAGEN Plasmid Kit 9.3 100%
2x CsCl 2.6 99%
Silica-gel slurry 1230.0 24%
* 宿主菌:大肠杆菌DH5α 质粒:pRSVcat.
† 1 ng LPS = 1.8 EU.
‡ 根据表中数据计算.
无内毒素DNA配合原代细胞得到高转染率* DNA纯化方法 转染细胞百分比
EndoFree Plasmid Kit 21.0% ± 0.93
QIAGEN Plasmid Kit 8.1% ± 0.57
Silica-gel slurry 5.2% ± 0.74
* 原代兔胃壁细胞转染pEGFP-N2(CLONTECH),pEGFP-N2由所示的方法制备。使用Effectene Transfection Reagent进行转染。该数据是细胞表达GFP的百分率,由转染48小时后绿色荧光细胞数量确定。转染效率是每种纯化方法制备的超过2个不同的DNA中6–9个复制样本的平均值。(数据由C. Chew and J. Parente友情提供, Department of Molecular Medicine and Genetics, Medical College of Georgia, Augusta, Georgia, USA.)
原理
纯化的质粒DNA内毒素污染水平取决于所用的纯化方法(参见”Endotoxin levels in plasmid preparations”)。硅胶技术纯化的DNA具有非常高的内毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和两次CsCl超速离心可获得相对低水平内毒素的纯DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的内毒素去除步骤,获得<0.1 EU/µg的质粒DNA。
QIAfilter、HiSpeed和EndoFree Plasmid Kits提供的QIAfilter Cartridges是特殊设计的过滤装置,用于代替细菌细胞碱裂解后的离心步骤。QIAfilter Cartridges可完全去除SDS沉淀,清除细菌裂解液,相比离心可大量节约时间,减少1小时的质粒纯化时间。QIAfilter Maxi Cartridges在几秒钟内,推动液体通过过滤器,以注射的方式将裂解物清除。
QIAGEN-tips中独特的阴离子交换树脂(不提供EndoFree Plasmid Buffer Set)专为核酸纯化而开发。它卓越的分离性能使得DNA纯度与连续两次CsCl梯度离心获得的DNA纯度相当。由重力流驱动并持续运转的预装QIAGEN-tips,最大限度减少手动制备质粒所需的时间。整个QIAGEN质粒纯化系统不使用有毒物质,如苯酚,氯仿,溴化乙锭和CsCl,最大限度地减少对用户和环境的危害。
内毒素,又称脂多糖或LPS,是革兰氏阴性菌细胞膜的组成部分,如大肠杆菌(参见Bacterial cell wall)。内毒素在质粒解裂纯化过程中释放,并显著地降低内毒素敏感的细胞株转染效率。此外,内毒素与DNA竞争“自由”转染试剂,影响转染实验。内毒素也诱导巨噬细胞和B细胞等免疫细胞中非特异性免疫反应,从而导致转染结果的误读。这些反应包括诱导的蛋白质和脂类,如IL-1和前列腺素的合成。总体而言,内毒素在转染实验装置中是不可控变量,影响结果的可重复性,使它们难以对比、解读。在基因治疗研究中,内毒素可造成内毒素休克综合症和激活补体级联,干扰研究。
产品详细信息
EndoFree Plasmid Maxi Kit (10) qiagen12362
纯化得到至多500 μg无内毒素高转染级纯质粒或柯斯质粒DNA
纯化得到的DNA内毒素低于0.1 EU/µg
纯化流程快,同时去除内毒素
获得高产量的高拷贝质粒DNA
使用LyseBlue,获得最佳的裂解和高产量的DNA
EndoFree Plasmid Kits基于阴离子交换技术,可快速制备不含内毒素的质粒DNA。QIAfilter Cartridges通过过滤快速澄清裂解液,DNA产量至多500 μg(Maxi)、2.5 mg(Mega)和10 mg(Giga)。制备的DNA纯度超过两次CsCl梯度离心法所得DNA的纯度,非常适合超转染级纯的应用。
性能
EndoFree Plasmid Maxi Kit将高效的内毒素去除步骤整合到质粒纯化过程中,不需要额外步骤,也不需用亲和柱去除脂多糖。通过QIAfilter Maxi Cartridge过滤细菌裂解液,通过重力流QIAGEN-tip 500阴离子交换柱纯化质粒DNA。100–250 ml培养菌液至多可纯化500 µg DNA。(培养量取决于质粒拷贝数量、插入片段大小、宿主菌和培养介质。)纯化的DNA无内毒素(<0.1 EU/µg DNA)。
EndoFree Plasmid Kits去除细菌在裂解过程中释放的内毒素,内毒素会影响原代细胞和敏感培养细胞的DNA转染。从EndoFree Plasmid Kits得到的无内毒素DNA高度适用于可重复且结果可靠的转染
质粒制备中的内毒素水平* 质粒准备方法 内毒素(EU†/µg DNA) 平均转染效率‡
EndoFree Plasmid Kit 0.1 154%
QIAGEN Plasmid Kit 9.3 100%
2x CsCl 2.6 99%
Silica-gel slurry 1230.0 24%
* 宿主菌:大肠杆菌DH5α 质粒:pRSVcat.
† 1 ng LPS = 1.8 EU.
‡ 根据表中数据计算.
无内毒素DNA配合原代细胞得到高转染率* DNA纯化方法 转染细胞百分比
EndoFree Plasmid Kit 21.0% ± 0.93
QIAGEN Plasmid Kit 8.1% ± 0.57
Silica-gel slurry 5.2% ± 0.74
* 原代兔胃壁细胞转染pEGFP-N2(CLONTECH),pEGFP-N2由所示的方法制备。使用Effectene Transfection Reagent进行转染。该数据是细胞表达GFP的百分率,由转染48小时后绿色荧光细胞数量确定。转染效率是每种纯化方法制备的超过2个不同的DNA中6–9个复制样本的平均值。(数据由C. Chew and J. Parente友情提供, Department of Molecular Medicine and Genetics, Medical College of Georgia, Augusta, Georgia, USA.)
原理
纯化的质粒DNA内毒素污染水平取决于所用的纯化方法(参见”Endotoxin levels in plasmid preparations”)。硅胶技术纯化的DNA具有非常高的内毒素水平。QIAGEN、QIAfilter、HiSpeed Plasmid Kits和两次CsCl超速离心可获得相对低水平内毒素的纯DNA。EndoFree Plasmid Buffer Set包含完整的内毒素去除步骤,获得<0.1 EU/µg的质粒DNA。
QIAfilter、HiSpeed和EndoFree Plasmid Kits提供的QIAfilter Cartridges是特殊设计的过滤装置,用于代替细菌细胞碱裂解后的离心步骤。QIAfilter Cartridges可完全去除SDS沉淀,清除细菌裂解液,相比离心可大量节约时间,减少1小时的质粒纯化时间。QIAfilter Maxi Cartridges在几秒钟内,推动液体通过过滤器,以注射的方式将裂解物清除。
QIAGEN-tips中独特的阴离子交换树脂(不提供EndoFree Plasmid Buffer Set)专为核酸纯化而开发。它卓越的分离性能使得DNA纯度与连续两次CsCl梯度离心获得的DNA纯度相当。由重力流驱动并持续运转的预装QIAGEN-tips,最大限度减少手动制备质粒所需的时间。整个QIAGEN质粒纯化系统不使用有毒物质,如苯酚,氯仿,溴化乙锭和CsCl,最大限度地减少对用户和环境的危害。
内毒素,又称脂多糖或LPS,是革兰氏阴性菌细胞膜的组成部分,如大肠杆菌(参见Bacterial cell wall)。内毒素在质粒解裂纯化过程中释放,并显著地降低内毒素敏感的细胞株转染效率。此外,内毒素与DNA竞争“自由”转染试剂,影响转染实验。内毒素也诱导巨噬细胞和B细胞等免疫细胞中非特异性免疫反应,从而导致转染结果的误读。这些反应包括诱导的蛋白质和脂类,如IL-1和前列腺素的合成。总体而言,内毒素在转染实验装置中是不可控变量,影响结果的可重复性,使它们难以对比、解读。在基因治疗研究中,内毒素可造成内毒素休克综合症和激活补体级联,干扰研究。