UE Green I, 20× in water(PCR级)
基本信息
产品名称 | UE Green I, 20× in water(PCR级) |
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英文名称 | UE Green I, 20× in water(PCR Grade) |
规格或纯度 | 20× in water |
运输条件 | 冰袋运输 |
一般描述
储存条件
本产品 4℃避光保存,有效期见外包装。使用前,将产品室 温下解冻,并轻轻涡旋混匀,解冻后所有实验应在冰上操作。 该产品避免反复冻融。
产品介绍
Biolife Green I是一种结合于dsDNA 双螺旋小沟区域的 具有绿色发射光的荧光染料。Biolife Green I 与 dsDNA 结合 后荧光信号会增强 800-1000 倍,是一种常用的 qPCR 荧光 染料。该染料经济实惠、使用方便,具有高灵敏度,信噪比 高等优势,可应用于基因表达差异分析,基因芯片等。
使用方法
1. 建立如下实验体系:(仅供参考)
名 称 | 体 积 |
10×的无 Mg 2+聚合酶缓冲液 | 5 µL |
50 mM MgCl2 | 2.5 µL |
2 mM dNTP | 5 µL |
20×Biolife Green | 2.5 µL |
Taq DNA polymerase | 1-5 units |
F, R Primers | 各 0.1-0.5 µM |
模板 DNA | 适量 |
dH2O | 补充总体积至 50 µL |
注:DNA 模板的添加量通常在 100 ng 以下。因不同种类的 DNA 模板中含有的靶基因的拷贝数不同,必要时可进行梯 度稀释,确定合适的 DNA 模板添加量。cDNA 作为模板时 的添加量不要超过 PCR 反应液总体积的 10%。
2. 执行实时定量 PCR 程序,采集荧光信号。
程序 | 温度 | 时间 | 循环 |
酶激活 | 95℃ | 2 min | 1 |
变性 | 95℃ | 5 s | 45 |
退火 | 50-60℃ | 5 s | 45 |
延伸 | 72℃ | 25 s | 45 |
3. 分析数据。
注意事项
1. Biolife Green I 的使用浓度是保证荧光定量 PCR 实验成功 的关键因素。染料浓度过低会使荧光信号变化降低,导致低 拷贝的样品可能无法检出,而在高浓度时又会抑制 PCR 反 应。所以一般在使用 Biolife Green 染料时应根据实际情况优 化使用浓度,反应的终浓度为 1×到 0.2×之间。 2. 提高 Mg 2+浓度可以降低 Biolife Green I 对 PCR 反应的抑 制作用。我们建议在用Biolife Green I 进行荧光 PCR反应时, Mg 2+浓度比无 Biolife Green I 的普通 PCR 反应高出 0.5~3 mM。 3. 为了您的健康,请穿实验服并戴一次性手套进行操作。
相关属性
储存温度 | 2-8°C储存,避光 |
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品牌 | Jinpan |